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大鼠亚甲基四氢叶酸还原酶ELISA试剂盒说明
文章来源:江苏力生生物科技有限公司   添加时间:2018/9/7 8:53:58 点击率:1151

实验原理:

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)水平。用纯化的大鼠5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR),再与HRP标记的羊抗大鼠抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)含量。

样本处理及要求

1、血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2、血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3、尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4、细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5、组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6、标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

7、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

注意事项:

1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3、各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4、请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6、底物请避光保存。

7、严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9、本试剂不同批号组分不得混用。

计算:

以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。                  

试剂盒性能:

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

2.批内与批间应分别小于9%和11%

检测范围:                                             

50 U/L -1000 U/L                                 

1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6个月

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